便攜式(shì)三聚(jù)氰胺檢(jiǎn)測(cè)儀(yí)/酶標儀(yí) 型號(hào):HAD-MB100

產品描(miáo)述(shù)
檢(jiǎn)測方法
HAD-MB100便(biàn)攜式(shì)三聚氰胺檢測(cè)儀，利(lì)用(yòng)酶(méi)聯免疫(yì)吸附(fù)測定法用(yòng)食品及(jí)飼料中三聚(jù)氰胺的定(dìng)量測定。
檢測原(yuán)理(lǐ)
HAD-MB100便攜(xié)式(shì)三(sān)聚氰胺檢測(cè)儀，酶聯免(miǎn)疫吸附(fù)測定法定(dìng)量(liáng)測(cè)定三聚(jù)氰(qíng)胺(àn)殘留。利(lì)用萃(cuì)取液通過(guò)均質(zhì)及振(zhèn)蕩(dàng)的(dí)方式提取樣品(pǐn)中的(dí)三聚氰胺行(háng)免(miǎn)疫測定。將三聚氰(qíng)胺酶標(biāo)記物，樣(yàng)品(pǐn)萃取(qǔ)物及標準加入(rù)到(dào)已(yǐ)經(jīng)包(bāo)被有(yǒu)三(sān)聚氰胺抗體的微(wēi)孔(kǒng)中開(kāi)始(shǐ)反應。在(zài)30分鐘的(dí)孵育過(guò)程中，樣品萃取(qǔ)物(wù)中(zhōng)的三聚(jù)氰胺與(yǔ)三聚氰(qíng)胺酶(méi)標記物競爭結合(hé)微(wēi)孔中(zhōng)的(dí)三聚氰(qíng)胺抗(kàng)體，孵(fū)育30分鐘(zhōng)後(hòu)洗掉(diào)小(xiǎo)孔中(zhōng)所(suǒ)有沒有結(jié)合(hé)的三(sān)聚氰(qíng)胺及三聚氰(qíng)胺(àn)酶標(biāo)記物。在(zài)用(yòng)去(qù)離子水清洗結束(shù)後，每孔(kǒng)中加入(rù)清澈(chè)的底物(wù)溶液，結合的(dí)酶標(biāo)記(jì)物將無色的底(dǐ)物轉化為(wéi)藍色的物質(zhì)。孵(fū)育30分鐘後停(tíng)止此反(fǎn)應，根據各孔(kǒng)顏(yán)色深(shēn)淺(qiǎn)行數據(jù)讀(dú)取。依據標準的顏色得出樣品(pǐn)中三(sān)聚(jù)氰胺的的濃(nóng)度值(zhí)。
實驗所需(xū)設備及(jí)材料
三聚(jù)氰胺(àn)檢測試劑盒（目前常(cháng)用口試劑(jì)有(yǒu)美(měi)Abraxis公(gōng)司和美Beacon公司的）
318C酶標(biāo)儀(yí)台(tái)或HAD-MB100便(biàn)攜式(shì)三聚氰(qíng)胺檢測儀（配有450nm濾光片）
1－5ml可(kě)調(tiáo)移(yí)液(yè)器
100－1000ul可調(tiáo)移(yí)液器.
20－200ul可調(tiáo)移液器.
蒸餾水(shuǐ)或(huò)去離(lí)子水..
可吸取50ul的移液器及吸(xī)頭.
可(kě)吸(xī)取(qǔ)50ul和100ul的八道移(yí)液(yè)器及吸頭.
吸水紙或相當的吸水材料.
450nm的酶(méi)標儀.
計(jì)時器.
洗瓶
混旋器(qì).
20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸餾(liù)水(shuǐ)定容(róng)至1000ml.
注(zhù)意(yì)事(shì)項(xiàng)
配(pèi)套使用試劑(jì)，不要同其它(tā)公司的產(chǎn)品混用(yòng)，不(bù)要將(jiāng)不同批(pī)次的(dí)產品(pǐn)混(hùn)用(yòng)。
樣(yàng)品稀釋或含有雜(zá)質很可(kě)能(néng)對結(jié)果的準確(què)性(xìng)有(yǒu)影響(xiǎng)。
不要使用(yòng)過期(qī)的產(chǎn)品。
使用(yòng)之前將(jiāng)所有試(shì)劑回(huí)升至室溫，但(dàn)不(bù)要(yào)放置(zhì)過(guò)24小時(shí)。
三(sān)聚(jù)氰胺(àn)屬於有(yǒu)毒性的化學品，請小(xiǎo)心(xīn)處理(lǐ)。
停止液(yè)是1N鹽(yán)酸，避免接(jiē)觸皮(pí)膚。
樣(yàng)品製備(bèi)（以美Beacon試劑為例）
濕的寵物(wù)食(shí)品萃(cuì)取(qǔ)方法（稀釋(shì)倍(bèi)數：100）
均質(zhì)樣(yàng)品(pǐn)至(zhì)布丁狀。
稱(chēng)取2g樣品加(jiā)入10mL 60%甲醇(chún)/水(shuǐ)溶液，並劇烈振(zhèn)蕩。
聲萃(cuì)取(qǔ)1分鐘。
漩(xuán)渦混合(hé)1分(fēn)鐘，然(rán)後靜置5分(fēn)鐘，使(shǐ)樣品(pǐn)分層。
3000 g 室(shì)溫(wēn)離(lí)心5分(fēn)鐘(zhōng)。
用玻璃纖維(wéi)濾(lǜ)紙(zhǐ)過濾(lǜ)上(shàng)清液，並將(jiāng)萃(cuì)取液(yè)收(shōu)集(jí)於(yú)幹淨試管(guǎn)中。
用樣品稀(xī)釋液(yè)將濾液20倍(bèi)稀釋（如：0.1mL濾(lǜ)液(yè)+1.9mL 10%甲(jiǎ)醇/20mMPBS）
移取(qǔ)150 ul 行(háng)分析(xī)。
注(zhù)意(yì)：用此方法測定(dìng)了8個(gè)添加有15ppm三(sān)聚氰胺(àn)的貓糧（非要(yào)求(qiú)召回），回收率(shuài)範(fàn)圍(wéi)為(wéi)75%-117%。
本方法隻可作為樣品(pǐn)篩選(xuǎn)方法，不可(kě)作(zuò)為zui終確(què)認(rèn)方法。
小(xiǎo)麥(mài)麵筋(jīn)蛋白萃(cuì)取方(fāng)法(fǎ)：（稀釋(shì)倍數：500）
1.均(jūn)質或混匀(yún)小(xiǎo)麥麵(miàn)筋蛋白樣品。
2.稱取(qǔ)0.2g均質好(hǎo)的樣品加入10mL 酸(suān)化(huà)的60%甲醇(chún)/水溶液(yè)(1mL 1N HCl/ 100mL 60%甲醇(chún)/水(shuǐ))。
3.漩渦(wō)混(hùn)合(hé)並聲(shēng)萃取(qǔ)，使樣(yàng)品溶解（確(què)保(bǎo)樣品中(zhōng)沒(méi)有結塊(kuài)）。
4.用樣品(pǐn)稀釋液稀釋萃(cuì)取(qǔ)液(yè)按照1:10比(bǐ)例(lì)。（0.5mL+4.5mL 10%MeOH/20 mM PBS）。
5.10000轉(zhuǎn)/分(fēn)離(lí)心(xīn)上(shàng)清液(yè)10分鐘。
6.用(yòng)G6玻(bō)璃纖維濾紙過(guò)濾上清(qīng)液，並(bìng)將(jiāng)萃(cuì)取液(yè)收(shōu)集於(yú)幹淨試管中。
7.移取(qǔ)150 ul 行(háng)分析。
注意：如(rú)果(guǒ)樣品(pǐn)中含有大量(liáng)的添加物，需(xū)要加入(rù)更(gēng)大量的(dí)萃取(qǔ)溶液(yè)，以(yǐ)保(bǎo)證(zhèng)萃取效率(shuài)。
操作(zuò)人依(yī)據(jù)自己的(dí)判斷力(lì)，如(rú)果測試(shì)結果，需要加(jiā)入兩(liǎng)倍(bèi)的萃取(qǔ)溶(róng)液（0.2/20mL），行二(èr)次測定。
幹(gān)的寵物食品(pǐn)萃(cuì)取(qǔ)方法（稀(xī)釋倍(bèi)數：200）
1.質器均(jūn)質(zhì)幹的寵物飼料(liào)樣(yàng)品。
2.稱取(qǔ)1g樣(yàng)品加入(rù)10mL 60%甲醇/水溶液(yè)，並(bìng)劇(jù)烈(liè)振(zhèn)蕩。
3.聲萃(cuì)取1分(fēn)鐘(zhōng)。漩渦(wō)混合1分(fēn)鐘，然後靜(jìng)置(zhì)5分鐘，使(shǐ)樣(yàng)品分層。
4.3000 g 室溫離(lí)心5分鐘(zhōng)。
5.用G6玻(bō)璃(lí)纖維(wéi)濾(lǜ)紙過濾(lǜ)上(shàng)清(qīng)液(yè)，並(bìng)將萃取液收集於幹淨(jìng)試管中。
6.用樣(yàng)品(pǐn)稀釋(shì)液將濾液20倍稀(xī)釋（如：0.1mL濾液(yè)+1.9mL 10%甲醇/20mMPBS）
7.移(yí)取(qǔ)150 ul 行(háng)分(fēn)析(xī)。

免疫(yì)測定過(guò)程 (注意: 標準(zhǔn)及樣品(pǐn)做(zuò)平行試驗(yàn)以(yǐ)增加準確度)
將(jiāng)所有試劑及(jí)樣品(pǐn)回(huí)升(shēng)至室(shì)溫(wēn)20-280C，但不(bù)要放(fàng)置(zhì)過(guò)24小時(shí)。
從(cóng)鋁(lǚ)箔(bó)袋(dài)中拿(ná)出要(yào)求數(shù)量的(dí)微(wēi)孔條，放入(rù)幹燥(zào)劑(jì)並(bìng)重新(xīn)封好袋(dài)子(zǐ)以免微孔(kǒng)條受潮
吸取150ul標準(zhǔn)，樣(yàng)品到對應(yīng)微(wēi)孔中，保證(zhèng)每(měi)種(zhǒng)溶液使(shǐ)用(yòng)幹淨(jìng)的吸頭(tóu)吸取，避免交(jiāo)叉(chā)汙染(rǎn)。加(jiā)入50ul三聚氰(qíng)胺(àn)酶(méi)標記溶液到每(měi)個小孔中(zhōng)。
混合(hé)60秒(miǎo)，20-28攝(shè)氏度下孵(fū)育30分鐘(zhōng)。
將(jiāng)微孔中(zhōng)的溶(róng)液倒入(rù)水槽(cáo)中，用(yòng)蒸(zhēng)餾水(shuǐ)充滿(mǎn)微孔，震蕩(dàng)後倒(dǎo)掉(diào)，重復三次，總共(gòng)四(sì)次(cì)洗(xǐ)板(bǎn)。
在(zài)吸水紙(zhǐ)上拍(pāi)打(dǎ)，盡可(kě)能將(jiāng)水拍幹。
每個(gè)微(wēi)孔中(zhōng)加入(rù)100ul底(dǐ)物溶液(yè)。
20-28攝(shè)氏度下，孵育30分(fēn)鐘(zhōng)。
每個(gè)微孔中加入100ul停止液(yè)。
450nm下讀板(bǎn)。
結果分析(xī)
HAD-MB100便攜(xié)式三(sān)聚氰(qíng)胺檢(jiǎn)測(cè)儀，半(bàn)定量的結果是(shì)由(yóu)樣(yàng)品(pǐn)的吸光(guāng)率與(yǔ)標(biāo)準的吸(xī)光(guāng)率的(dí)簡單(dān)對比而(ér)來(lái)判定(dìng):樣品(pǐn)的顏色(sè)比標準的顏色淺則(zé)三(sān)聚氰胺(àn)的(dí)濃(nóng)度比(bǐ)標準(zhǔn)樣的濃度, 樣品(pǐn)的(dí)顏(yán)色(sè)比標(biāo)準的顏色(sè)深(shēn)則三(sān)聚氰胺的濃度(dù)比標(biāo)準(zhǔn)樣的(dí)濃度(dù)低(dī)。
定量(liáng)分析(xī)需要(yào)繪製(zhì)以(yǐ)標準樣的吸(xī)光率為X軸,以標準(zhǔn)樣的濃度的(dí)半對(duì)數為(wéi)Y軸的曲綫圖.依據標(biāo)準樣(yàng)吸光率(shuài)的點畫(huà)成直(zhí)綫,如(rú)此樣品(pǐn)的光吸(xī)收率可在(zài)綫上找(zhǎo)到,與(yǔ)此相對應的(dí)Y軸則(zé)為樣(yàng)品的濃度(dù),樣品光吸(xī)收率範圍(wéi)應(yīng)比標(biāo)準樣的zui底(dǐ)範圍(wéi),比zui範(fàn)圍低, 即(jí)可(kě)說(shuō)明此樣品中三聚(jù)氰胺的含量大於500ppb或小於20ppb。
 HAD-MB100便攜(xié)式三聚氰胺檢(jiǎn)測儀操(cāo)作(zuò)步驟：
 
試劑(jì)盒(hé)大同小異(yì)；
１．將樣品用甲(jiǎ)醇或水(shuǐ)提取，離心(xīn)
２．將(jiāng)試(shì)劑盒梅標板(bǎn)室(shì)溫(wēn)下回溫(wēn)至少(shǎo)個(gè)小(xiǎo)時(shí)
３．提取(qǔ)液(yè)＼標準１５０微升，移(yí)入酶標板(bǎn)井(jǐng)
４．加入(rù)ＨＲＰ５０微升
５．震(zhèn)動，反(fǎn)應(yīng)３０分鐘(zhōng)
６．倒掉反(fǎn)應液(yè)，用(yòng)清洗(xǐ)液衝(chōng)洗４次，吸水(shuǐ)紙吸水(shuǐ)
７．加入(rù)色原底(dǐ)物１００微升，放置(zhì)３０分鐘
８．加入(rù)終(zhōng)止液(yè)１００微升(shēng)，
９．１５分(fēn)鐘(zhōng)後４５０ｎｍ下比(bǐ)色(sè)
１０．根據(jù)標準曲(qū)綫，計算(suàn)三聚氰胺的濃(nóng)度(dù)
試劑盒(hé)，酶(méi)標(biāo)儀４５０ｎｍ，１０００微升＼２００微(wēi)升(shēng)，５０微升(shēng)移液(yè)槍(qiāng)和(hé)八(bā)道移液槍，吸(xī)水紙(zhǐ)，槍(qiāng)頭等(děng)。
注意(yì)移液時間(jiān)和避免(miǎn)交叉汙(wū)染(rǎn)。每次(cì)要有(yǒu)標準曲綫(xiàn)。